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多肽合成的步驟
多肽合成
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01樹脂的選擇及氨基酸的固定
聚乙烯一乙二醇脂、聚酰胺以及交聯(lián)聚苯乙烯這三類樹脂主要用來作為多肽合成的高分子的載體。
通過保護(hù)的氨基酸的羧基同樹脂的反應(yīng)基團(tuán)之間形成共價(jià)鍵來來使氨基酸的固定得以實(shí)現(xiàn)。
02氨基、羧基、側(cè)鏈的保護(hù)及脫除
需要保護(hù)暫不參與形成酰胺鍵的氨基和羧基,以便使具有特定的氨基酸順序的多肽成功合成,同時(shí)也需要保護(hù)氨基酸側(cè)鏈上的活性基團(tuán),當(dāng)完成反應(yīng)后,再去除保護(hù)基團(tuán)。
這些年以來,F(xiàn)MOC合成法的應(yīng)用相當(dāng)?shù)膹V泛。
一般使用形成酯基的方法來保護(hù)羧基。
逐步合成中保護(hù)羧基的常用方法為甲酯和乙酯。
03成肽反應(yīng)
固相中的(多肽合成)成肽反應(yīng)通常是在溶液內(nèi)放入一個(gè)氨基被保護(hù)的氨基酸以及一個(gè)羧基被保護(hù)的氨基酸,
需要將酰胺鍵生成,不形成肽鍵,活化活化變成混合酸酐、活潑酯、酰氯
或用強(qiáng)的縮合劑(如碳二亞氨)形成對(duì)稱酸酐等方法來使酰胺鍵形成為常用的手段。
04裂解及合成肽鏈的純化
裂解和脫側(cè)鏈保護(hù)基,F(xiàn)MOC法直接用TFA,而BOC法用TFA+H。
有些時(shí)候,由于不同的條件,也會(huì)采用其它堿、光解、氟離子和氫解等脫保護(hù)方法。
一般采用高效液相色譜、親和層析、毛細(xì)管電泳等進(jìn)一步的精制、分離與純化合成肽鏈。
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