如何培養(yǎng)LLC1細(xì)胞(一)?
　　細(xì)胞培養(yǎng)是當(dāng)前細(xì)胞生物學(xué)乃至整個(gè)生命科學(xué)研究與生物工程中基本的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。

　　動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)為疫苗生產(chǎn)、藥物研制與腫瘤防治等醫(yī)學(xué)實(shí)踐提供了全新的手段。細(xì)胞培養(yǎng)包括原核生物細(xì)胞，入細(xì)菌;真核單細(xì)胞生物，入酵母菌、四膜蟲等;植物細(xì)胞與動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)以及于此密切相關(guān)的病毒的培養(yǎng)。

　　動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

　　體外培養(yǎng)的細(xì)胞可分為原代細(xì)胞(LLC1細(xì)胞)與傳代細(xì)胞(LLC1細(xì)胞)。原代細(xì)胞是指機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。有人把培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)，適應(yīng)在體外培養(yǎng)下條件下持續(xù)傳代培養(yǎng)的細(xì)胞稱為傳代細(xì)胞。

　　分散的細(xì)胞懸液在培養(yǎng)瓶中很快(在幾十分鐘至數(shù)小時(shí)內(nèi))就貼附在瓶壁上，這就稱為細(xì)胞貼壁。

　　分散呈圓球形的細(xì)胞一經(jīng)貼壁就迅速鋪展并開始有絲分裂，逐漸形成致密的細(xì)胞單層，稱為單層細(xì)胞(sigle layer cell),這種培養(yǎng)方法稱為單層細(xì)胞培養(yǎng)。

　　對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

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